猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒
使用说明书
【简介】
试剂盒由抗原包被板、血清稀释板、酶标二抗及其它试剂制成，利用间接ELISA方法检测猪血清中存在的猪2型圆环病毒特异性抗体，从而对猪2型圆环病毒疫苗免疫效果做出评价。
【用途】
适用于猪圆环病毒2型疫苗的免疫后评价。
【原理】
本试剂盒利用猪圆环病毒2型核衣壳蛋白（Cap）包被微孔板。在试验中，若待测血清样品中含有抗圆环病毒2型的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，形成抗原-抗体复合物。之后加入的酶标二抗将与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合，并可使TMB底物溶液形成蓝色产物。显色反应经终止液终止后呈黄色，终通过测定450nm波长下吸光度得到结果。
【试剂盒主要成分】
【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【试剂配制】
使用前，试剂盒内除酶标二抗外的各种试剂都应恢复到室温（25℃左右）。25倍浓缩的洗涤液恢复至室温或略微加热后摇动使沉淀的盐溶解，然后用去离子水作25倍稀释，稀释好的洗涤液在2～8℃可以存放7天。酶标二抗在使用前用样品稀释液按1:100倍稀释，现配现用。
【样品稀释】
标准样品与待检样品均在血清稀释板中按1:50倍的体积稀释（推荐稀释方法：245μL样品稀释液中加5μL
待检血清样品）。
【操作步骤】
1、取抗原包被板，先加入50μL样品稀释液，再将稀释好的待检样品和对照样品各取50μL加入到抗原包被板孔中，用移液器轻轻吹打混匀。阴性对照和阳性对照各设2孔，置37℃温育30分钟。
2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。
3、每孔加入稀释好的酶标二抗100μL，置37℃温育30分钟。
4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。
5、每孔加入等体积混合好的底物溶液A与底物溶液B100μL，避光显色10分钟。
6、每孔加终止液50μL，10分钟内测定450nm波长吸光度。
【结果判定】
参考农业部关于印发《2013年国家动物疫病强制免疫计划》的通知，被检抗体正向间接血凝实验抗体效价≥25为阳性。根据该通知制定结果判定标准：
1实验结果同时满足下列条件，方为有效：
标准阳性对照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。
标准阴性对照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。
2疫苗免疫后抗体水平检测结果的判定：
样品OD450nm≤0.3，判为圆环病毒2型抗体阴性。
样品OD450nm＞0.3，判为圆环病毒2型抗体阳性。
样品OD450nm处于0.3±0.02临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。
3对猪圆环病毒2型免疫保护力检测结果的判定：
样品OD450nm≤0.3，判为无保护力，所检样品对圆环病毒2型感染无保护力。
样品OD450nm介于0.3与0.6之间，判为保护力低下，所检样品抗体水平较低，对流行毒株有一定保护力。
样品OD450nm≥0.6，判为有保护力，所检样品抗体水平较高，在攻毒试验中可提供高于90%的抵抗力。
样品OD450nm处于0.3±0.02或者0.6±0.02临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。
【注意事项】
1本底过高可导致结果整体水平偏高，实验过程需二抗清洗干净，或实验中添加空白对照。
2环境温度低于15℃可导致结果整体水平偏低，实验过程需环境温度尽量接近25℃，或适当延长底物液显色时间。
3底物液A和底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。
4浓缩洗涤液用去离子水稀释，如果发现有结晶，应水浴加热使其溶解。
5酶标二抗应现配现用。
64℃过夜孵育样品及酶标二抗可以获得更好的结果。
【贮存】2～8℃避光保存
【有效期】9个月
【生产企业】重庆澳龙生物制品有限公司