非洲猪瘟病毒夹心ELISA抗体检测试剂盒（夹心法）
非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒（夹心法）使用说明书
名称：非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒
预期用途：本试剂盒用于检测猪血清中非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体。
实验原理：
本试剂盒应用双抗原夹心法测定样本中是否含有非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体。用重组的ASFV抗原包被微孔板，制成固定相，往包被抗原的微孔中加入样本，再与HRP标记的ASFV抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下终转化成黄色。颜色的深浅和样品中的非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体含量呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过OD值计算判断样本中是否含有非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体。
试剂盒组成：
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试剂准备：
1.1×洗涤液配制：取混匀后20×浓缩洗涤液至去离子水中20倍稀释。
2.1×样品稀释液配制：取混匀后20×样品稀释液至去离子水中20倍稀释。
3.样本准备：使用前用1×样品稀释液将样本稀释10倍（建议20微升血清，180微升样本稀释液）。
4.底物液的配制（现配现用）：使用前将显色液A、显色液B按体积比1：1混合，避光。
实验流程：
使用前将试剂盒的所有组分和待检样本平衡至室温。
1.按前述试剂准备项准备好各种试剂、阴阳性参考品和待测样本；
2.计算检测样本所需酶标条，将酶标条从铝箔袋取出，剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口，低温保存；
3.样本孵育：分别加入阴性对照、阳性对照和待测样本，并做好记录，100μL/孔，混匀；再将酶标抗原分别加入微孔板中，50μL/孔，混匀后贴膜，37℃孵育30分钟；
4.洗板：弃去孔中液体，加入1×洗涤液（300μL/孔）洗板五次，拍干；
5.显色：将预先配制的底物液加入微孔板中，100μL/孔，混匀，37℃避光孵育10分钟；
6.终止：加入100μL/孔终止液至微孔板中，轻轻震动微孔板至显色均匀；
7.读值：20分钟内读取450nm的光吸收值。
结果判定：
1.ASFV阴性参考品的OD值记为ODN；ASFV阳性参考品的OD值记为ODP；样品的OD值记为ODS；
2.CutOff值（阈值）的计算：CutOff值=ODN+0.15；
3.试验成立条件：ODN值≤0.15且ODP值≥0.5，试验结果有效，否则重新进行试验；
4.结果判定：样本的OD值≤CutOff值，结果判为阴性；样本的OD值＞CutOff值，结果判为阳性。
注意事项：
1.请严格按照说明书操作。
2.本试剂盒应该由经过充分培训的人员使用。
3.不同批号的试剂盒不能混用。
4.本试剂盒各组分只能一次性使用，不能重复使用。
5.整个实验过程应尽量在干净无尘的环境下进行。
6.本试剂盒与待检样本使用前必须平衡至室温。
7.浓缩洗涤液使用前需20倍稀释，若洗液出现结晶，可置37℃使之溶解。
8.为了避免样本中任何潜在的生物危险，检测样本应视为具有传染性物质，避免接触到皮肤和粘膜。
9.洗板机在每天使用时应进行校正注液量和残留量，注意管道是否通畅。洗涤时，确认每孔中洗涤液都注满微孔。每次洗涤后都需在无尘吸水纸上拍干微孔中的液滴。在洗板结束后应立即进行下一步，不可使酶标板干燥。避免较长时间中断实验步骤，以确保每孔实验条件均一。
10.如质控品测值不在预期范围内，则该次实验无效，应重复实验。
11.本试剂盒中所有试剂应置于2-8℃保存，有效期为12个月。板条若未能一次用完，剩余板条用塑料袋封口后密封保存。
12.此试剂盒仅用于体外诊断。
生产企业：
企业名称：肇庆大华农生物药品有限公司
地址：广东省肇庆高新技术产业开发区创业路5号